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Nature Methods:新方法扩增PCR技术目标DNA
新闻来源:生物谷 时间:2014-08-05

聚合酶链反应又称PCR技术,是20世纪80年代中期发展出来的体外核酸扩增技术,其原理类似于DNA的体内复制,只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适的条件,能在一个试管内将一种目标基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断。PCR技术被认为是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。

   研究人员在9月在线出版的《自然—方法学》期刊上报告,他们发展出一种策略能够在一次反应中扩增多个目标DNA。

   PCR技术的实施需要获得位于目标DNA序列两端的两个引物。因为这些引物序列位对特定的目标区域而言是唯一的,所以,从理论上讲,多种不同目标的引物能够同时用于相同的PCR反应中,这种反应又称多元反应。但在实际运作中,多引物会导致意想不到的底物和引物二聚体的形成,这些由外界因素或作用所产生的矫作物严重影响了扩增的效率。

   为将这些矫作物的影响降到最小程度,Anthony  Brookes和同事研制了一种固相扩增法,即通过将每种引物固定在一种固体表面而将它们彼此分开。他们的实验表明,这种名为MegaPlex-PCR的技术能随机选择性地扩增75个基因组区域,扩增质量也很好。(科学时报)

原始出处:

Nature Methods - 4, 835 - 837 (2007)
Published online: 16 September 2007; | doi:10.1038/nmeth1091

MegaPlex PCR: a strategy for multiplex amplification

1 Linda Strömqvist Meuzelaar1, Owen Lancaster1, J Paul Pasche2, Guido Kopal2 & Anthony J Brookes1

 Department of Genetics, University of Leicester, University Road, Leicester, LE1 7RH, UK.

2  Roche Applied Science, Nonnenwald 2, 82372 Penzberg, Germany.

Correspondence should be addressed to Anthony J Brookes ajb97@leicester.ac.uk

'MegaPlex PCR' is a robust technology for highly multiplexed amplification of specific DNA sequences. It uses target-specific pairs of PCR primers that are physically separated by surface immobilization. Initial surface-based amplification cycles are then coupled to efficient solution-phase PCR using one common primer pair. We demonstrate this method by co-amplifying and genotyping 75 unselected human single-nucleotide polymorphism (SNP) loci.


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